ta fire rene reagensrør og måler 100 mikroliter etylacetat inn den første med pipette . Legg 50 mikroliter til andre , 25 til den tredje og 5 til fjerde .
To
Endre pipette tips og legge avionisert vann til hvert rør . For det første røret legger 1,8 ml, deretter 1,9 ml på det andre røret , 1,95 mL til det tredje rør og 1,6 ml til den fjerde. Rør med pipettespissen å blande , å være sikker på å endre pipetter mellom rørene .
3
Transfer 1 ml av blandingen i hvert rør til fire rene kyvetter . Igjen , må du huske å endre pipetter mellom rørene .
4
Sett den første av de fire kyvetter til en svart, kalibrert spektrofotometer og måle absorberingsevne på 215 nm. Hvis du ikke er sikker på hvordan du endrer bølgelengde og /eller tomt din spektrofotometer , se produsentens instruksjoner ; framgangsmåten , kan variere noe avhengig av enheten. Ta opp verdien du måle og ta målinger for innholdet i de tre andre kyvetter .
5
Ta en ren skilletrakt og sørge for at vannkranen eller avløp på slutten er stengt . Fjern stopperen på toppen.
6
til 2 ml av etylacetat , etterfulgt av 15 ml vann og 15 ml oktanol . Om nødvendig , kan du støtte din skilletrakt med en ring på en ring stå mens du gjør det .
7
Fjern glasstrakt og erstatte stopperen . Hold skilletrakt i begge hender med den ene hånden plassert over stopperen for å sikre at det ikke kommer ut . Rist trakten frem og tilbake et par ganger . Så vipper den bakover og åpne vannkranen for å avlaste trykket . Gjenta denne prosedyren til du har ristet innholdet for totalt 30 sekunder eller så . Sørg for at du alltid riste det en gang eller to ganger og deretter avlaste trykket . Hvis du tillater press for å bygge seg opp inne , kan det føre til at stopperen til å komme ut og slipp alt innholdet på din lab benk .
8
Plasser skilletrakt på en ring festet til en ring stativ . Tillate innholdet å separere i to lag. Det øvre laget er octanol ; det nedre laget er vann. Samle vannfasen og måle dens absorpsjonsevne i UV området av spekteret .
9
Plasser en liten ( ~ 25 ml) kolbe under skilletrakt og tapp noen få ml av vannlaget inn i det kolbe . Ta en ml av innholdet i flasken med din micropipette og overføre det til en ren kyvette .
10
Sett kyvetten inn i spektrofotometer og måle absorberingsevne på 215 nm.
11
Ta absorbans data og skriv det inn i et regneark program som Open Office eller Excel . For de fire etylacetatnivåene prøver du forberedt på begynnelsen , skriv molariteten i én kolonne og absorberingsevne i en nabo kolonne . Den molariteten for de fire prøver er som følger: 100 mikroliter prøve: 0,5091 molar ; 50 mikroliter prøve: 0,2545 molar ; 25 mikroliter prøve: 0,1273 molar ; og 5 mikroliter prøve : . 0,02545 molar
12
Bruk regnearkprogram for å forberede en scatter -plot graf av disse fire datapunkter med molarities eller konsentrasjoner på x - aksen og absorberingsevne på y . Hvis du ikke er sikker på hvordan du gjør dette , kan du se brukerhåndbokeneller hjelpemenyen for regnearkprogrammet . Ved hjelp av regnearkprogram , passer en lineær ligning eller linje av beste tilpasning av formen y = mx + b til disse dataene . Den x - variabelen i denne ligningen er konsentrasjonen , mens y - variabelen er den absorpsjonsevne .
13
Ta absorberingsevne av 2 mL etylacetat prøve fra skilletrakt og dele det med m - verdi fra ligningen regnearkprogrammet beregnes og trekk fra b - verdi . Hvis m - verdien er 1,2 , for eksempel, og b- verdien er 0,2 , mens absorpsjonsevne er 0,42, subtrahere 0.2 fra 0,42 og dividere resultatet med 0,5 for å oppnå en konsentrasjon på 0,183 mol pr liter .
14
Multipliser din konsentrasjon verdi av 0.015 liter siden du hadde 10 ml vann i skilletrakt . Hvis konsentrasjonen var 0,183 , for eksempel , ville du multiplisere med 0,015 for å få 2,745 x 10 ^ -3 mol etylacetat stede .
15
Trekk resultatet fra trinn 14 fra 0,02036 mol etylacetat , som var det beløpet du opprinnelig lagt . Hvis du skulle 2,745 x 10 ^ -3 mol i vannlaget , for eksempel trekke dette nummer fra 0,02036 mol for å oppnå 0,01762 mol som er tilstede i oktanol sjiktet.
16
Del mengden tilstede i oktanol lag med beløpet til stede i vannlaget , og dette gir deg fordelingskoeffisienten av væske . Dette eksemplet bruker etylacetat , men du kan bruke andre væsker så lenge du justere konsentrasjonene og verdier for molariteten hensiktsmessig .