Vei opp tre miligrams av peptid på en skala . Plasser den i et sentrifugerør . Til omtrent 0,3 ml vann , 0,3 ml av Sanger største -reagens og 0,075 ml av natriumbikarbonat .
2
Tillat sentrifugerøret inkubere ved romtemperatur i en time. Under inkubasjonen ristes røret forsiktig for å hindre blandingen fra å separere . Kontroller pH-verdien av løsningen hvert 15. minutt, og pH-papir . PH bør holdes over ni . Hvis det begynner å slippe, legg en liten mengde natrium bikarbonat (ca. en dråpe med Pasteur pipette ) .
3
Etter inkubasjon , tilsett 1,5 ml vann, og en lik mengde eter. Tillat løsningen å separere i lag . Du må kanskje sentrifuger blandingen for å skille det . Fjern eterlaget (den øverste , gule laget ) med en pipette og kast den.
4
Juster pH ned til 1,0 ved å sakte tilsette saltsyre . Legg en liten bit av syre gangen , rør forsiktig , så sjekk pH med pH-papir . Til sammen , bør den kreve ca 0,15 ml syre. Hvis pH-verdien går under 1,0 , legg en liten mengde ( ikke mer enn en dråpe ) natrium bikarbonat .
5
Legg 3 ml eter . Tillat blandingen å skille . Nå er det øverste laget ( gult , eterlaget ) inneholder DNP- forbindelsen . Ved hjelp av en pipette , forsiktig trekke ut dette laget , og overføre det til et rent reagensrør. Sett testrøret til side og la væsken til å fordampe , etterlater en tørr , gul solid .
6
Vask solid med aceton . Legg 0,3 mililiters aceton , rør forsiktig og trekke ut væsken med en pipette . Legg 0,75 mililiters av syre til prøverør . Din peptid er nå merket og klar til å bli hydrolysert og analysert med kromatografi metode du velger .