Alle blotting teknikker starte med gel elektroforese. Gelen er mer eller mindre som et tynt rektangel av gelatin. En liten mengde av et spesielt utarbeidet biologiske molekyler er satt på gelen ved den ene ende , og et elektrisk felt påføres fra den ene enden til den andre. De fremstilte molekyler er elektrisk ladet, slik at det elektriske felt trekker dem gjennom gelen. De beveger seg langsomt gjennom den tykke gelen til feltet slås av. De lettere molekyler få hevet raskere og flytt deg lenger , de tyngre molekyler ta lengre tid å bevege seg slik at de ikke gjør det så langt .
Bruke Gels
I praksis flere forskjellige prøvene er satt ned spredt ut langs den ene kanten av gelen . Etter at det elektriske felt tilføres, de forskjellige prøvene spredd ut på vei mot den motsatte kanten av gelen . Spredningen av hver prøve kalles en " lane ". Den veibane vil vanligvis ha et par forskjellige bånd svarende til molekyler av forskjellige vekter innenfor hver prøve . Det finnes flere forskjellige måter å gjøre bandene synlig. Analysere gel gir biologer en idé om størrelsen på de forskjellige molekyler , men for å få mer informasjon , er en annen metode som trengs . Det er der blotting kommer inn.
Blotting
Blotting er en måte å ta molekylene som har blitt spredt fra hverandre i gel og gjøre dem tilgjengelig for flere analyse. På samme måte trekkpapir soaks opp løse farge --- eller gjorde i de dager da folk brukte fyllepenner --- biologisk blotting " soaks up" molekylene fra gelen inn i et annet materiale. Molekylene ende opp i samme mønster , men nå i en spesiell papir eller plast ark . Molekylene blir bundet til arket , slik at de ikke beveger seg lenger, og da kan de bli dynket i en løsning av andre probemolekyler som gir mer informasjon om molekylene . Det finnes flere forskjellige måter å gjøre disse trinnene, men prinsippet er det samme for dem alle .
Sør , Nord og Vest Blotting
Biolog Edwin Southern var første til å utvikle et blotting teknikk. Han utviklet alle detaljer som trengs for å være sikre på at DNA gel elektroforese kunne være nøyaktig overført og målt i blotting materiale. At metoden ble oppkalt etter ham : Southern Blotting . Andre forskere funnet ut hvordan å gjøre det samme generelle teknikken arbeid for RNA , og --- i typisk morsom vitenskapsmann stil --- kaller sitt detaljerte metoden Northern Blotting . Senere ble prosedyren endret for å måle proteiner , og ble kalt Western Blotting . Alle tre teknikkene bruke de samme prinsippene : . Southern tiltak DNA , Nord- tiltak RNA , vestlige tiltak proteiner