Hvordan finne pH av Cytoplasma

Potential for hydrogen, eller pH-verdi , er et mål på surhet eller alkalitet av en væske . Det er viktig på mange felt, blant annet biologi , kjemi og miljølære . Måling av pH-verdien er enkel i de fleste situasjoner . Lakmuspapir kan føres inn i fluidet, og endring i fargen på papiret angir i hvilken grad væsken er syre eller base. I de tilfeller hvor væsken som skal undersøkes i en celle , andre metoder må være devised.Things du trenger
2 ', 7' -bis -(2 = karboksyetyl ​​) -5 (og -6 ) - karboksyfluorescein ( BCECF ) , eller et annet stoff som har varierende fluorescens under forskjellige pH-betingelser arkiv fluorescens -spektrofotometer med dobbelt monochromators , eller et lignende instrument for måling av fluorescens
Centrifuge
Forutbestemte kalibreringskurver måle korrelasjon av intracellulær BCECF -og cytoplasmiske pH

Vis flere instruksjoner
en

Cool temperaturen på celleprøve til 41 til 50 grader Fahrenheit . Dette gir en bedre absorption rate av fluorescerende materiale av cellene .
To

Legg celleprøve med en fluorescens induserende stoff som BCECF . Dette gjøres ved å legge til BCECF til cellemediet, og deretter omrøring av blandingen forsiktig i 2,5 timer . Den BCECF absorberes gjennom permeable membran av cellene .
3

Separer cellene fra mediet og som ikke er absorbert BCECF ved å kjøre prøven gjennom en sentrifuge . Sett cellene inn i en egen beholder .
4

Varm opp celleprøve til 98,6 grader Fahrenheit for 30 minutter , til tilnærmet forholdene i den menneskelige kroppen . Hvis cellene under behandling normalt lever på annen miljø enn den menneskelige kropp , justere prøven til den riktige temperatur.
5

eksitere celleprøvenved omrøring . Dette bidrar til å øke den fluoriserende aktivitet.
6

måle fluorescerende intensitet av celleprøvenved hjelp av spektrofotometer. For best resultat, bruk eksitasjon lys i bølgelengder på 500-510 nanometer . Ved disse bølgelengdene , er det en større spredning av fluoriserende intensitet, slik at det er lettere å skille resultatene. Den fluorescerende intensitet måles i relative fluorescerende enheter ( RFU ) , et forhold mellom lysstyrke av stoffet i en opphisset , fluorescerende tilstand til normal , unexcited tilstand . Jo høyere RFU , jo lysere stoff , i forhold til normal tilstand .
7

Sammenligne spektrofotometer resultater til pre - tegnet kalibreringskurver . Generelt betyr høyere fluorescerende høyere pH i prøven . Med en eksitasjonsbølgelengde på 510 nm , vil et stoff med en pH på 6,4 viser en RFU på omtrent 20, mens et stoff med en pH på 9,9 ville vise en RFU på omtrent 55 .