persulfate ion i ammoniumpersulfat tilsvarer to sulfationer forbundet med en svak oksygen oksygen obligasjon. Denne bindingen kan holde seg eller brekke i to , gir sulfat radikaler --- svært reaktive molekyler med en uparet elektron . Den sulfat radikal kan reagere med vann for å generere en hydroksyl -radikal, eller det kan reagere med akrylamidmonomerenfor å starte polymerisasjonsreaksjonen . TEMED fungerer som en katalysator som akselererer hastigheten som persulfat ioner danner radikaler .
Chain Reaction
Når en hydroksyl eller sulfat radikal har dannet , angriper den en akrylamidmonomer , idet en av elektronene i dobbeltbindingen . Den akrylamid -monomer er nå et radikal med uparede elektron, slik at den fortsetter å angripe en annen akrylamidmonomer på en lignende måte . Denne serien av hendelser skaper en raskt voksende kjede av akrylamid monomerer koblet av enkeltbindinger . Den kjedereaksjon bare slutter når to radikaler reagerer med hverandre .
Cross - linking
p Hvis akrylamid var tilstede på egen hånd , ville det ikke danner den tykke gel du trenger for SDS -PAGE . Polymerene må være kryssbundet for å danne en gel med de rette egenskaper, og det er der bisakrylamid kommer i. dobbeltbindinger i bisakrylamid også tjene som et mål for radikaler i reaksjonen , og fordi den har to områder der det kan være angrepet av radikaler , er det til slutt tatt inn to av de voksende polymerer . Følgelig polymerer ender opp med cross mellom dem på tilfeldige steder langs lengden av hver kjede .
Hensyn
Polymeriseringsreaksjonen er veldig rask , så når du ' ve tilsatt TEMED og persulfat , vil det finne sted meget raskt. Renheten av dine reagenser er viktig fordi miljøgifter kan påvirke resultatene. Akrylsyre , for eksempel, kan tilsettes til polymeren og skaper ionebytter- områder som kan forårsake lokale pH- variasjoner i en gel. Den resulterende gel kan fortsatt inneholde noe akrylamidmonomer , og akrylamid er en nervegift , så alltid ta nødvendige forholdsregler når du arbeider med SDS gels .