Fjern ampuller med karbonanhydrase , cytokrom C og aprotinin fra kjøleskapet eller fryseren og la dem oppnå romtemperatur . Til 4 mg av hvert protein til et sentrifugerør per milliliter av gel i filtrerings- kolonnen. Legg 961 mcl av basal salt per milligram protein til hvert sentrifugerør for å oppløse proteinene . Legg 39.2 MCL av ferritin per milliliter av gel til hvert rør , og deretter blande i en sentrifuge . Pumpe filtrerings kolonne
to
Slå av og lukke vannkranen inngangen kolonnen på . Skru , men ikke fjerne, toppen av filtreringskolonne . Sett pumpen til den maksimale strømningshastigheten for kolonnen og pumpen startes på nytt inntil buffermaterialeter trukket av. Stoppe pumpen.
3
Tilsett 1 ml av hvert protein til filtreringskolonneved hjelp av en pipette pumpe. Drypp proteinene ned på innsiden av kolonnen fra en høyde på 1 cm til 2 cm , som arbeider rundt den indre kant av kolonnen. Tillat proteinblandingen for å slå seg ned på toppen av den gel -matrise.
4
Plasser utløpsrørettil pumpen i en ren, tørr 250 ml gradert sylinder . Start pumpen med en hastighet på 0,30 ml pr minutt og drives proteinene inn i gelmatriksen . Når pumpen er i gang , skyll sidene av røret ved hjelp av pipette pumpe og en liten mengde buffer væske. Når proteinene er fullt inn gelmatriksen , reduseres pumpehastigheten til 0,02 ml per minutt og pumpen i en 5 cm og 7 cm lag av buffer væske på toppen av matrisen .
5
Koble kolonne cap fra vannkranen . Hetten på kolonnen og innsiden av søylen ved hjelp av vitenskapelige rengjøringskluter ren. Cap kolonnen installere . Fyll buffertankenmed buffer væske . Fest en sprøyte fat til vannkranen , og åpne den . Bruk av sprøyten for å trekke en liten mengde buffer gjennom røret og inn i sprøyten . Steng vannkranen og fest den til toppen av kolonnen . Åpne vannkranen og se etter lekkasjer .
6
Kjør kolonnen på 0,02 ml per minutt i flere dager , inntil ferritin bandet nærmer seg slutten av kolonnen . Samle alle filtrerings gel som pumpes ut i målesylinder .