Fordeler og ulemper med Western Blot

Western blot , en analytisk teknikk som brukes til å lokalisere et bestemt protein i en gitt prøve , anvender evnen til et enzym eller fluorescens -merkede primære antistoff til å binde til dets antigen . Det er en tre - trinns prosess som begynner med gel elektroforese , etterfulgt av membran blotting og sondering med antistoffer . Protein påvisning kan være direkte eller indirekte , med den sistnevnte ved hjelp av et merket sekundært antistoff rettet mot den primære . Skjønt akseptert som en rutinemessig proteinanalyseteknikken, har western blot begrensninger samt fordeler . Fordel: Følsomhet

En av de største argumentene i favør av western blot er dens følsomhet. På grunn av sin evne til å påvise så lite som 0,1 nanogram protein i en prøve , kan teknikken teoretisk tjene som en effektiv tidlig diagnostisk verktøy , avføling av selv den minste immunogene respons fra et virus eller bakterier i en pasientprøve. Et indirekte western blot videre bygger på denne følsomheten fra det sekundære antistoff evne til å forsterke intensiteten av signalet detektert av avbildningssystem . Større følsomhet betyr at færre antistoffer er nødvendig for testing, som kutter ned laboratoriekostnader betydelig
Advantage : . Spesifisitet

Den vestlige blot teknikken skylder sin spesifisitet til to store medvirkende faktorer. Først sorterer gel elektroforese en prøve til proteiner av ulik størrelse , kostnad, og eksteriør. Denne prosess er i seg selv et stort skritt mot deteksjon, som dannet bånd i gelen allerede gi hint om størrelsen av protein eller polypeptid av interesse . Spesifisiteten av antistoff -antigen- interaksjon tjener som den andre stor faktor . Fordi spesifikke antistoffer viser affinitet for spesifikke proteiner , kan prosessen selektivt detektere et mål protein selv i en blanding av 300.000 ulike proteiner
Ulempe: . Utsatt for falske eller Subjektive Resultater

på tross av sin sensitivitet og spesifisitet , en western blot kan fortsatt gi feilaktige resultater. En falsk - positive resultater når et antistoff reagerer med et protein som ikke er ment , som er det ofte skjer når en pasient blir testet for HIV tilfeldigvis har tuberkulose eller et antall av parasittiske infeksjoner. En falsk -negative , på den annen side lett resultere hvis større proteiner ikke får tilstrekkelig tid til å overføre skikkelig til membranen . Uriktig blotting og behandling ofte produsere skjev , falmet, eller til og med flere band , noe som gjør testresultatene lagt tolkningen av teknikeren
Ulempe: . Høye kostnader og tekniske Etterspørselen

kostnaden for en western blot er en sammensetning av de store individuelle utgifter til merket antistoffer , dyktige analytikere og laboratorieutstyr. En delikat prosess , western blotting krever presisjon i alle ledd for riktig identifikasjon av en prøve er bestanddeler. En mindre feil i reagenskonsentrasjonen eller i inkubasjonstiden kan være katastrofalt for hele prosessen. Endelig utstyret som kreves for å avsløre og avbilde - kjemiluminescens , lysstoffrør, radioaktive, eller laser deteksjonssystemer - kan bli for dyrt for den gjennomsnittlige mikrobiologi enheten

.