Mål 200 mg BSA på veiepapirved hjelp av en laboratorieskala. Legge den i en mikrosentrifuge tube . Tilsett 2 ml buffer til mikrosentrifugerør inneholdende 200 mg BSA. Merke dette røret " 1."
2
Vortex Tube 1 til BSA er helt oppløst.
3
Fjern 500 ul av BSA i buffer og overføring det til et andre rør. Merke dette røret "2." Legg 500 ul av vanlig buffer til Tube 2.
4
Fjern 200 ul av BSA i buffer fra Tube 1 og overføre den til et nytt rør . Merke dette røret " 3." Legg 800 ul av vanlig buffer til Tube 3.
5
Fjern 100 ul av BSA i buffer fra Tube 1 og overføre den til et nytt rør . Merke dette røret " 4." Legg 900 ul av vanlig buffer til Tube 4.
6
Fjern 10 ul av BSA i buffer fra Tube 1 og overføre den til et nytt rør . Merke dette røret "5. " Legg 990 ul av vanlig buffer til Tube 5. Rør 1- 5 omfatter en gradert standard serie . Det første rør har en kjent konsentrasjon av 100 mg /ml ; den andre , 50 mg /ml; den tredje, 20 mg /ml , den fjerde, 10 mg /ml; og den femte , 1 mg /ml . Hvert rør inneholder ca 1 ml oppløsning .
Lag Antistoff Fortynninger
7
Tilsett 5 0ul av renset antistoff til 95 0ul av buffer . Merke dette røret " A."
8
Legg til 10 ul av renset antistoff til 990 ul av buffer . Merke dette røret " B. "
9
Legg til to ul av renset antistoff til 998 ul av buffer . Merke dette røret " C."
Legg plate
10
Plasser 0,5 ml ren buffer i de første brønnene i to kolonner av multiwell plate.
side 11
Plasser 0,5 ml av innholdet i en tube i de andre brønnene i de to første kolonnene i multibrønnplate . Fortsett ned gradert serie til de to første kolonnene inneholder 0,5 ml av en BSA standardløsning fra hver av Tubes 1-5, herunder brønner for vanlig buffer .
12
Tilsett 0,5 ml av Bradford Reagens til hver også. Virvle plate å blande reagens med proteinholdige løsninger , være forsiktig så du ikke søler innholdet i noen av brønnene . Vent i 5 minutter.
13
Les platen i henhold til protokollen spesifikke for din plate leseren med en bølgelengde på 595 nm.
Beregn antistoffkonsentrasjonen
14
Kopier verdiene leses fra platen leseren inn i Microsoft Excel.
15
Lag en graf fra de to kolonner med verdier som representerer BSA standard ved hjelp av diagramveiviseren i Microsoft Excel.
16
Plott punktene målt fra antistoff fortynninger i Excel- graf. Les tilsvarende konsentrasjonen av protein i henhold til verdien av y-aksen for antistoffet fortynning punkt på Excel- grafen.
17
Avhengig av om du bruker verdiene oppnådd fra Tube A, B eller C , multiplisere verdien med enten 20, 40 eller 500 , henholdsvis. Den resulterende verdien er konsentrasjonen av din renset antistoff .