Metoder for en gjær Tre Hybrid System

Replication av kromosomer , messenger RNA prosessering , oversettelse av proteiner , og kritiske beslutninger i tidlige stadier av utviklingen avhenger av samspillet av DNA , RNA og proteiner . Disse interaksjonene er de grunnleggende biologiske prosesser av genuttrykk og proteinsyntese . Forskere ofte Saccharomyces cerevisiae , de samme arter av gjær som brukes i bakervarer og brygging , for å studere de gener som koder for spesifikke proteiner og analysere interaksjoner mellom proteiner og andre molekyler. Gjæren tre - hybrid system er ett av tre varianter av gjær to - hybrid system som brukes til å studere disse interaksjonene . The Two - Hybrid System

to - hybrid metoden brukes til å påvise protein - protein interaksjoner ved å se for uttrykket av en reporter gen . Mange proteiner har minst to domener, eller diskrete strukturelle og funksjonelle enheter. Gal4 , et protein som finnes i Saccharomyces cerevisiae , har et DNA-bindingsdomene ( DBD ), og en aktiverings domene (AD) . I denne fremgangsmåten blir en hybrid-protein fusjonert til DBD og en andre til AD . Ingen reporter -genet blir uttrykt ved fusjon av bare en av hybrider. Siden Gal4 reporter genet er bare uttrykk når begge hybrider er til stede , er protein - protein interaksjon indikeres .
Tre- Hybrid System

De tre - hybrid metode identifiserer et reporter -genet for å påvise interaksjonen av proteinet med RNA. Den første hybrid-protein består av en DBD bundet direkte til et RNA- bindende domene . Den andre består av AD av Gal4 transkripsjonsfaktor knyttet til en RNA -bindende protein . Den RNA bindende områder kommuniserer med et hybrid molekyl av RNA som binder de to hybridproteiner til å danne et kompleks. Dannelsen av komplekset utløser ekspresjon av Gal4 reporter -genet. Siden reporteren genet er kun slått på ved dannelsen av de tre- hybrid kompleks , viser sin tilstedeværelse samspillet mellom RNA og protein .
The One - Hybrid System

ett - hybrid metoden brukes til å påvise samspillet av protein med DNA . En ett - hybrid system sikringer et enkelt protein , som forbinder AD direkte til DBD . I stedet for å identifisere en reporter -genet, ser denne metoden for et spesifikt protein som må gjenkjenne en target -sekvens av DNA. Tilstedeværelsen av den spesifikke protein indikerer et samspill av protein med DNA .
One-Two Hybrid System

en-to hybrid metode brukes for å studere protein - protein og protein - DNA interaksjoner samtidig. Ved hjelp av nylig utviklede gjærstammer , anvender denne metoden Gal4 reporter -genet for å identifisere protein-protein interaksjoner og et p53- konsensus for å identifisere protein - DNA interaksjon. Metoden er forventet å betydelig øke presisjonen på eksperimentelle resultater ved å redusere forekomsten av falske positiver kan oppnå i andre hybridsystemer .