Noen grunnleggende tiltak kan iverksettes for å fremskynde den samlede TOPO kloning prosessen og bidra til å sikre sin suksess . Først bør rør av levedyktige celler anbragt på is for å opprettholde deres akseptabilitet. Deretter bør den super optimal kultur (SOC ) medium , bakterievekst anriket med næringsstoffer , bli brakt til romtemperatur. De selektive plater bør da forvarmes til 37 grader Celsius slik at de er fullt klar når det gjelder tid til å bruke dem .
Kombinere Ingredienser
For å starte kloning prosessen bør en kombinasjon av 2 mikroliter av polymerase kjedereaksjon (PCR ) produkt , 0,5 mikroliter av salt-løsning , og 0,5 mikroliter av kloningsvektorbli kombinert i et 0,5 - ml sentrifugerør. Når kombinert, vil disse bestanddeler må settes ved romtemperatur og tillatt å inkubere i fem til ti minutter . Deretter vil de kombinerte bestanddeler tilsettes til " Top - 10 kjemisk kompetente celler" i en 50 mikroliter rør og plassert på is i ytterligere ti minutter. Etter dette må cellene bli underkastet varmesjokk ved 42 grader Celsius nøyaktig og plassert på is i ett minutt før 180 mikroliter av SOC medium tilsettes. Denne blandingen skal da ristes i en horisontal retning ved 200 rpm for en ekstra time på 37 grader Celsius .
Siste trinnene
En blanding av 50 mikroliter og 100 mikroliter av hver reaksjon skal bli belagt ut " på LB + AMP + X -gal plater og inkuberes uten risting over natten ved 37 C." Den neste dagen de tre hvite kolonier fra hver reaksjon bør bli plukket ut og plassert i 4 ml LB + amp og igjen å inkubere over natten ved en temperatur på 37 grader Celsius , mens blir ristet ved 200 rpm. Det siste trinnet er mini - utarbeidelse av plasmidene og venter på å se om prosessen var vellykket .