Hvordan Grow en parasittens Apicoplast Cells i en kultur

Apicoplasts er en type intracellulære organeller stede i encellede parasitter som forårsaker alvorlige sykdommer som malaria , toksoplasmose og koksidiose . Organeller er komplekse strukturer i en celle som ikke kan vokse og formere seg av seg selv . De oppsto da en stamfar til parasittene oppslukt en annen organisme , som var sannsynligvis relatert til rødalger . Fordi apicoplasts er ikke uavhengige celler , kan de ikke bli dyrket i en kultur av seg selv . Å vokse dem man trenger å vokse parasitter . Det som følger er instruksjoner til kultur på den røde blodlegemer stadium av Plasmodium falciparum , som forårsaker malaria.Things du trenger
Parasite lager
RPMI 1640 kultur medium
Laminar Flow hette
Autoclave
Albumax II serum erstatning
D - glukose
Hypoxantine
HEPES
Gentamicin sulfate
Kultur kolber en Cell inkubator
Røde blodcellerpå
Vis flere Instruksjoner
dyrking Plasmodium falciparum
en

Sett celle kuvøse til 37 grader Celsius og justere gassammensetning til en prosent oksygen , 3 prosent karbondioksid , og 96 prosent nitrogen .
2

Autoklaver alle ikke - sterilt utstyr og materialer:
3

Arbeid i laminær hette for å opprettholde sterilitet , forberede det endelige medium ved å legge følgende til RPMI 1640 kultur medium :

D - glukose til en endelig konsentrasjon på 20 mM .

Hypoxantine til en endelig konsentrasjon på 0,2 mM .

HEPES til en endelig konsentrasjon på 25 mM .

gentamicin sulfat til en sluttkonsentrasjon på 25 mg /L.

Albumax II til en endelig konsentrasjon på 0,5 prosent vekt /volum
4

Fordel den totale mengden av medium laget i forrige trinn i så mange kulturflasker som ønsket, og plassere dem på shaker i kuvøse .
5

Når mediet har nådd 37 grader Celsius , legge parasitten lager .
6

Endre kultur medium hver dag for å holde parasitter godt matet og levende .
7

Legg røde blodcellerannenhver dag . De vil bli smittet av de nye parasitter som blir generert i kultur. Hvis de blir for mange for en kolbe , dele innholdet i to eller flere ekstra seg.